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Wound healing assay 伤口愈合试验

时间:2022-06-28   访问量:1769

伤口愈合试验简介

伤口愈合试验或划痕试验是研究体外集体细胞迁移的常用方法。该方法基于以下观察:在汇合的细胞单层上产生人工间隙(“划痕”)后,划痕边缘的细胞将向开口迁移并建立新的细胞-细胞连接,从而关闭差距。伤口愈合测定的初始步骤包括在细胞单层中创建划痕,随后在多个时间点捕获图像以监测间隙闭合的进展,以及间隙闭合百分比和/或细胞迁移率的量化1 .

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研究人员可以使用这些 CytoSMART 设备进行伤口愈合实验:全板扫描仪Omni、荧光细胞成像仪Lux3 FL、迷你活细胞成像仪Lux2和Lux3 BR。
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使用活细胞成像进行伤口闭合分析

使用板成像仪 CytoSMART Omni 的功能,用户可以研究多孔板中细胞的迁移模式并比较多种处理/条件。在这里,进行了伤口愈合试验以研究 C6 大鼠神经胶质瘤细胞的迁移。CytoSMART Omni 允许用户可视化间隙闭合的进程,提供多个孔的概览(图 1A)以及放大选定的孔或划痕区域(图 1A;图 2))。集成的图像分析算法会自动突出显示(蓝色;图 1A)缺少细胞的孔区域;它还量化了间隙表面闭合(图 1B)和细胞迁移速度(图 1C)。

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图 1 | C6胶质瘤细胞迁移分析。将 C6 大鼠神经胶质瘤细胞接种在 48 孔板中,用移液器吸头弄伤,并使用 CytoSMART Omni 监测 17 小时。(A) 集成图像分析算法自动选择无细胞(“划痕”)区域(以蓝色突出显示)并监控划痕闭合在指定时间段内的进展。生成的输出提供了有关 (B) 划痕随时间变化的区域和 (C) 细胞迁移速度的信息。(B) 和 (C) 显示 (A) 中所示的四口井的间隙闭合数据。

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图 2 | C6 胶质瘤细胞迁移和划痕闭合的延时视频。将单层 C6 大鼠神经胶质瘤细胞铺在 48 孔板的一个孔中,用移液器吸头划伤,并使用 CytoSMART Omni 通过全孔概览进行记录。每小时采集一次明场图像,共持续 23 小时。


CytoSMART Omni:样品的有效比较

另一个例子突出了使用 CytoSMART Omni 对多个测试样本进行高通量比较的优势。在下面的视频中,将 NIH-3T3 小鼠成纤维细胞接种在单个 96 孔板中,并用一系列浓度的肌球蛋白 II 抑制剂 blebbistatin 和肌动蛋白聚合抑制剂 cytochalasin D 进行处理。接下来,对细胞进行处理体外划痕试验。使用 CytoSMART Omni 以 1 小时的成像间隔捕获图像 48 小时。结果表明,增加 blebbistatin 和 cytochalasin D 的浓度会抑制 NIH-3T3 细胞迁移(图 3)。

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图 3 | 用 blebbistatin 和 cytochalasin D 处理后的 NIH-3T3 细胞迁移分析。 用 blebbistatin 和 cytochalasin D处理 NIH-3T3 小鼠成纤维细胞的单层,用移液器吸头受伤,并监测 48 小时(1 小时成像间隔)使用 CytoSMART Omni。蓝色区域定义了孔中缺少细胞的部分(“划痕”)。白紫色箭头表示添加化合物的浓度增加。比例尺 = 1000 µm。


参考

1. Liang, C.-C., Park, A. Y. & Guan, J.-L. In vitro scratch assay: a convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro. Nat. Protoc. 2, 329–333 (2007).

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