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Clonogenic assay 克隆形成试验

时间:2022-06-28   访问量:1553

克隆基因检测简介

克隆形成测定或菌落形成测定是一种体外 细胞存活测定,可评估单细胞在治疗中存活并繁殖以形成菌落1的能力。最初开发克隆形成试验是为了研究辐射对哺乳动物细胞的影响。最近,它们已被广泛用于测试抗血管生成剂和细胞毒剂、化学疗法和基于细胞因子的药物对肿瘤细胞和正常细胞2的功效。

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使用 CytoSMART Omni 活细胞成像仪,您可以分析和量化集落形成。在此处了解有关 Omni 的更多信息。

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用于分析集落形成的活细胞成像

活细胞成像可以解决传统克隆方案的缺点。首先,活细胞成像允许长时间监测菌落生长,而不会将数据采集限制在单一时间点。这允许收集有关特定治疗后细胞存活的更多信息,并实时观察细胞分裂和集落形成。通过连续成像,可以在更早的发育阶段检测到菌落形成,从而比采用传统方法更快地得出结论。没有端点固定或染色 步骤进一步减少了进行克隆形成测定所需的时间和材料。此外,集成的图像分析软件会自动检测新形成的菌落并评估其大小和圆形度。这不仅加速了数据分析,而且减少了分析结果解释中的偏差和主观性。

在下面的示例中,使用 CytoSMART Omni 对经过一系列阿霉素浓度处理的 CHO-K1 细胞进行了为期 7 天的成像。该测定在24孔板中进行,该板保持在37℃的标准CO 2培养箱内。

使用 CytoSMART 菌落检测算法,在单个孔中形成的细胞簇(即菌落)被自动量化(图 1A)并以橙色突出显示(图 1B)。这允许在整个潜伏期 (图 2A ) 中监测和量化细胞增殖和集落形成, 而不会错过任何关键时间点, 因为它通常发生在使用传统方法进行克隆化检测时。该算法还跟踪菌落大小(图 2B)和圆度(图 2C)的变化。

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图 1 | 未经处理的 CHO-K1 细胞在 7 天内的集落形成能力分析。(A) 集成菌落检测算法自动检测并计算每孔的菌落数。(B) 放大特定井后,菌落掩码覆盖突出显示单个细胞簇。

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图 2 | 多柔比星在体外可减少 CHO-K1 细胞的增殖和集落形成。(A) 测试板的轮廓。(B)未处理 (CTRL) CHO-K1 细胞和用 0.2 µM、0.5 µM、1.0 µM、2.0 µM 和 5.0 µM 阿霉素处理的细胞的存活曲线,以及 (C) 平均菌落大小和 (D) 的变化) 约 7 天的循环。

参考

1. Franken, N. A. P., Rodermond, H. M., Stap, J., Haveman, J. & van Bree, C. Clonogenic assay of cells in vitro. Nat. Protoc. 1, 2315–2319 (2006).

2. Munshi, A., Hobbs, M. & Meyn, R. E. Clonogenic Cell Survival Assay BT - Chemosensitivity: Volume 1 In Vitro Assays. in (ed. Blumenthal, R. D.) 21–28 (Humana Press, 2005). doi:10.1385/1-59259-869-2:021.

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